脯氨酸脱氢酶（ProDH）试剂盒微量法

脯氨酸脱氢酶（ProDH）试剂盒微量法说明书

微量法 100管/96样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品名称：脯氨酸脱氢酶（ProDH）试剂盒微量法

货号：LZ-S01105

规格 : 100管/96样

测试方法:微量法

产品分类：氨基酸代谢系列

发货地：上海

测定意义：

ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布广泛的一种渗透物质，在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸，降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

测定原理：

利用异硫氰酸甲酯检测ProDH催化的脱氢反应，600nm处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

 

试剂的组成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 2 mL×1 支， 4℃保存；

试剂二：液体 25mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂三：粉剂×1 瓶， 4℃保存；临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃

保存；

试剂四：粉剂×1 瓶， 4℃保存；临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃

保存；

试剂五：粉剂×4 支，4℃保存；

粗酶液提取：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆，1500g 4℃离心 15min，取上清液于一支新的 EP 管中，加入一滴试剂一（用 10μL 的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置 30min 后，16000g 4℃离心 20min，

取上清置冰上待测。

操作步骤:

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样,不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

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生化检测试剂盒常见问题：

在使用生化检测试剂盒时，可能会遇到一系列常见问题，这些问题主要涉及到试剂盒的使用、保存、有效期、样本处理以及实验操作等方面。以下是一些常见的问题及其解决方法：

一、‌测定原理‌：生化试剂盒通过化学反应或酶促反应测定样本中物质的含量或酶活性。常用的仪器包括分光光度计和酶标仪，它们的测定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可进行测定‌。

‌二、选择不同规格的试剂盒‌：根据实验的实际情况选择合适的试剂盒。如果实验室有酶标仪且具备检测波长，可以选择微量法试剂盒；如果有分光光度计及相应规格的比色皿，则可以选择常量法或微量法试剂盒。建议购买前仔细阅读说明书，确认自备的仪器和试剂是否符合要求‌。

‌三、保存方法‌：收到试剂盒后，如果暂时不用，应按照外包装上指示的温度保存。拆开包装后，应按照每个试剂的保存温度进行保存，注意有些试剂忌反复冻融，有些粉剂溶解后性质不稳定‌。

四、‌有效期‌：一般生化试剂盒的有效期为6个月，也有特殊货号的有效期为1年。具体以实际收到货物的标签信息为准‌1。

‌五、样本处理‌：新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定，但有些生理活性物质容易降解，建议使用新鲜样本测定。对于冷冻样本，建议在-70℃或液氮中保存。样本在不同温度下的保存时间有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存3个月‌。

‌六、土壤酶活性测定‌：对于土壤酶活性的测定，建议将鲜土风干并过筛后取样，以测定的重复性。若使用鲜土测定，需样本的颗粒大小一致且水分含量相似‌。

七、‌预测定‌：在进行正式测定前，建议选择2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。通过预测定可以全面反映样品特点、试剂质量、仪器设备稳定性和操作规范性，确保正式测定结果真实可靠‌。

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