CRT钙网蛋白ELISA试剂盒

CRT钙网蛋白ELISA试剂盒

---

我司提供的试剂仅供研究使用       

实验目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中CRT钙网蛋白的含量。

实验原理：

上海试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被CRT钙网蛋白的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中CRT钙网蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度

试剂盒组成：

操作步骤：

钙网蛋白试剂盒方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　钙网蛋白ELISA方法二　用于检测未知抗体的间接法：　　　

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

注意事项：

1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2.　在酶联ELISA试剂盒中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

(1)　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚、聚、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　（2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。

(3)　酶标记抗体工作浓度的选择：用直接ELISA检测试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4)　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

公司正在出售的产品：

MouseActivinA,ACV-AELISA试剂盒小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒

BLK Protein Human 重组人 BLK / B Lymphocyte Kinase 蛋白 (GST 标签)

CDK16 Protein Human 重组人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 标签)

HumanNon-PhosphorylatedInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISA试剂盒人未1酸化类生长因子结合蛋白-1ELISA试剂盒

10倍PB浓缩缓冲溶液100毫升

新型甲型H1N1流感病毒(IAV-H1N1)核测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

载玻片细胞IKB-ALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20

ChRM3 peptide 毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3抗原 0.5mgChRM3 peptide 毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3抗原

序列相似家族132成员A(FAM132A)重组蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 132, Member A (FAM132A)

DUSP14 Protein Human 重组人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 标签)

C-fos(i mmediate early gene, ieg 0.5mgC-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一种原癌基因)抗原

转化生长因子-β诱导蛋白IG-H3(TGFBI/BIGH3)ELISA试剂盒 ，英文名： TGFBI/BIGH3 ELISA Kit

小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA检测试剂盒Mouse1,3-βDglucosidaseELISAKit

样生长因子结合蛋白6抗体

15号染色体开放阅读框62抗体

肿瘤/睾丸抗原抗体12家族2抗体  Anti-XAGE2  WB IHC-P IHC-F IF  100ul

催产素受体(缩宫素受体)抗体

左心房

FAM21C蛋白抗体

酪氨酸激酶A/B/C抗体

去整合素样金属蛋白酶8抗体

GAL Protein Human 重组人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 标签)

LRP/MVP (Lung resistance related protein 0.5mgLRP/MVP (Lung resistance related protein) 肺耐药相关蛋白(抗原)

CRT钙网蛋白ELISA试剂盒ELISAKitFⅧAg小鼠第八因子相关抗原规格：48T/96T

TTR转甲状腺素蛋白ELISA试剂盒

Pax桩蛋白ELISA试剂盒

阴沟肠杆菌分离琼脂(ECIA)

乙酰胺肉汤生化管

胰酶细胞消化液(不含EDTA)

乙酰胺肉汤

胰酪胨大豆多粘菌素肉汤

胰酪大豆胨液体培养基管