牛神经肽Y受体Y2(NPYR2)ELISA试剂盒
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供应商 上海笃玛生物科技有限公司 店铺
认证
报价 人民币 2400.00元每盒
关键词 可定制,人ELISA试剂盒,酶联试剂盒,90分钟一步法
手机号 15214367449
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所在地 上海市宝山区河曲路118号6981室
更新时间 2024-05-27 14:40:08

详细介绍


牛神经肽Y受体Y2(NPYR2)ELISA试剂盒



ELISA实验通用规则


1、要移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。


2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后,要更换枪头。即使是吸取品时。


3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更。


4、实验时,要使底物避光保存。


5、用枪吸取时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。


6、吸取时,要用量程和需要量接近的枪去吸,误差。


7、将加到酶标孔中时,避免枪头和孔内,可使枪头上的液滴和孔壁,液滴会自然流下去。


8、全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。


9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。


10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去后,要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。


11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。


12、底物是光的,要在临用前现配。


13、检测前,要打开酶标仪,使之10分钟以上。


14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免。


15、待检样品要澄清,否则会影响结果。


16、温浴时间应遵守试剂盒规定。


17、应尽量做双孔实验,这样才能数据的准确性。


18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。






做好对照


正式试验时,应分别以阳性对照阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特反应,可采用羊、兔或BSA等封闭。


ELISA检剂盒应用定性夹心检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,这些就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa试剂盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。


酶联吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种灵敏、特异的学技术,用于检测抗原或的存在。其基本原理是将抗原或与酶结合,形成酶标抗原或,保留其活性,同时又保留酶的活性。然后将酶标抗原或与固相载体表面结合,形成酶-抗原-复合物通过底物显色反应,根据颜色变化来检测抗原或的存在。ELISA具有高灵敏度、高特、快速、易操作等优点,在医学、生物领域广泛应用。





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实验条件的选择


ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:


(1) 固相载体的选择:许多可作为固相载体,如聚氯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。


(2) 包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。


(3) 酶标记工作浓度的选择:用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验里准确地滴定其工作浓度。


(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。








 

关键词:可定制,人ELISA试剂盒,酶联试剂盒,90分钟一步法

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