牛S抗原(SAG)ELISA试剂盒

包括以下步骤：

(1)抗原表位的计算机筛选；

(2)抗原的制备；

(3)的采集；

(4)间接ELISA的建立；

(5)间接ELISA的性和特验证；

(6)试剂盒的性验证；

(7)对屠宰场进行临床检测。该简单、快速、灵敏度高、特强、性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制流行和由猪向人传播。

ELISA检剂盒应用定性夹心检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是型HEV毒株核心酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，这些就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa试剂盒的, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

ELISA法是诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、病及非传染病等方面的诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于流行病学调查。本法不仅可以用来测定，而且也可用于测定中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，

ELISA实验通用规则

1、要移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。有人员进行矫正。

2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的后，要更换枪头。即使是吸取品时。

3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更。

4、实验时，要使底物避光保存。

5、用枪吸取时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

6、吸取时，要用量程和需要量接近的枪去吸，误差。

7、将加到酶标孔中时，避免枪头和孔内，可使枪头上的液滴和孔壁，液滴会自然流下去。

8、全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀。也可以用酶标仪的晃动功能。

9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加。没有洗板机时，倒去后，要将酶标板在报纸或毛纸上拍干。

11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

12、底物是光的，要在临用前现配。

13、检测前，要打开酶标仪，使之10分钟以上。

14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免。

15、待检样品要澄清，否则会影响结果。

16、温浴时间应遵守试剂盒规定。

17、应尽量做双孔实验，这样才能数据的准确性。

18、对结果有疑问的样品要用其它进行确证。