293T人胚肾细胞的培养及应用

　一、细胞简介：

　　细胞名称：293T[HEK-293T]人胚肾细胞

　　平台编号:zl-056371

　　规格:1×10⁶cells/T25培养瓶

　　细胞信息:

　　种属人

　　年龄（性别）胎儿

　　组织来源肾

　　生长特性贴壁

　　细胞形态上皮细胞样

　　生长培养基DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　二、培养步骤

　　1）培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液；

　　2）无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次（按培养体积加入）；

　　3）加入适量胰酶消化适当时间（一般yimei为0.25%；9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，一次加入1mLyimei。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑，一般如果是细胞株，非原代培养，消化1－2分钟足矣）；

　　4）用枪头吹打数十次（视细胞类型而定。一般细胞株30－50次吧，耗时一般2分钟左右）；

　　5）加入适量体积培养基终止yimei消化（如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，可以加入1mL培养基；现在培养瓶（皿）里有2mL溶液）。

　　6）现在可以将溶液进行分瓶（2mL）。如果是细胞株，直接均分到两个培养瓶（皿）里。如果是原代培养，可以根据消化时间来对细胞进行分离；因此可以将溶液（2mL）都转入新的培养瓶（皿）。

　　7）将两个培养瓶（皿）补足培养基到正常体积（果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶，为5mL培养液）

　　8）镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁，悬浮在溶液中，呈圆形。一般2h之内会贴壁，如果已经贴壁，根据细胞类型有不同的形态，但通常都不是圆形。

　　9）镜下观察无误之后，再放入细胞培养箱。培养瓶（皿）放入之前，可以用消毒jiujing先擦一下。

　　10）传代之后，*二天细胞换液一次。当然，也可以视情况而定。

　　三、应用

　　用于被动靶向的磁共振成像及近红外成像双模态纳米探针研究：

　　通过SPIO@PEG/HID与人胚肾细胞293T及人乳腺癌细胞株MCF-7共孵育的方法评价探针的毒性,体外成像光学及磁性成像效果,分析两种细胞内材料含量的差异性,进一步探讨该探针潜在肿瘤靶向性。研究探针体外成像能力及靶向能力。

　　材料及方法：将SPIO@PEG/HID纳米颗粒与人乳腺癌细胞株MCF-7共同孵育后,

　　(1)通过普鲁士蓝染色定性观察细胞对SPIO@PEG/HED纳米颗粒吞噬情况；

　　(2)采用二甲基四氮唑法(Microculturetetrazoliumassay,MTT)测SPIO@PEG/HID对细胞活力的影响,设置人胚肾细胞293T细胞作为对照组；

　　(3)通过细胞透射电镜(TEM)分析纳米颗粒在细胞的分布：收集细胞悬液,用2.5%wuerquan 溶液40℃固定1h,室温下1%siyanghuae溶液固定1h,PBS清洗2-3次,每次5min,梯度yichun脱水,环氧树脂包埋,常规制作超薄切片,转移到铜网,透镜观察颗粒在细胞内的分布情况。

　　(4)将SPIO@PEG/HID分别以20ug/mL、50ug/mL、100ug/mL的浓度与MCF-7及293T细胞共孵育24h,后分别收集细胞。

　　(5)将细胞重悬于1mL1%琼脂糖溶液内,机械震荡使其分布均匀,置于3.0TMR上扫描。取一组细胞,以3000rp/min离心1min后去上清,置入IVIS荧光成像系统内成像。将一组细胞溶于1mL饱和盐酸溶液中,静止20min,后稀释40倍,送于ICP测定Fe元素含量。

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