牛抗促甲状腺素受体抗体(TSHRAb)ELISA试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

牛抗促甲状腺素受体(TSHRAb)ELISA试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被白蛋白（ALB）的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的白蛋白（ALB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

ELISA：本法主要用于检测IgM。由于IgM出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种的早期诊断。ELISA根据所用标记不同可分为标记抗原、标记、标记抗ELISA等几种，其中以标记抗原ELISA比较有代表性，该的主要程序为：① 用抗u链（抗IgM重链）包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

自从Engvall和Perlman(1971）报道建立酶联吸附试验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、、简便、易于化等优点，使其迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA由于特不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆进行ELISA试验，都大大了ELISA的特，加之电脑化程度的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和化，从而使其成为广泛应用的检测之一。如今ELISA已被广泛应用于多种和等的诊断。在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的。

样品收集、处理及保存

1.  ：使用不含热原和内的试管，操作中避免任何细胞，收集血液后，3000转离心10分钟将和红细胞迅速小心地分离。

2.  ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

ELISA （Enzyme-Linkedimmunosorbent assay）的基础是抗原或的固相化及抗原或的酶标记。这一的基本原理是：①使抗原或结合到某种固相载体表面，并保持其活性。②使抗原或与某种酶连接成酶标抗原或，这种酶标抗原或既保留其活性，又保留酶的活力。在测定时，把待测样本（测定其中的或抗原）和酶标抗原或按不同的步骤与固相载体表面的抗原或起反应。用洗涤的使固相载体上形成的抗原复合物与其他分开结合在固相载体上的酶量与标本中受检的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检的量直接相关，所以可根据颜色反应的深浅定性或定量分析。由于酶的催化速率很高，所以可地放大反应效果，从而使测定达到很高的度。

牛抗促甲状腺素受体(TSHRAb)ELISA试剂盒

 

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有组分使用前充分摇匀。

试剂的

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板

1.  手工洗板：甩尽孔内，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

 

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置品孔和样本孔，品孔各加不同浓度的品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

布ELISA：（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型检测技术。该是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为反应提供较大的表面积，反应的性，且容易洗涤，不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA类似，只是载体不同。以对布氏杆菌抗原的检测为例，C－ELISA的主要程序为：⑴ 把抗布氏杆菌的包被（吸附）在聚脂布上，并经洗涤及封闭；⑵ 加被检样品并于室温下感作30分钟，然后洗5次；⑶ 加酶标记的抗布氏杆菌，于室温下感作30分钟，然后洗涤5次；⑷ 加入底物液显色；⑸ 测定OD值。

 

试剂盒性能

1.  准确性：品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。

3.  特：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。