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<h1 background-color:#ffffff;"="" style="font-size: 16px;color: rgb(51, 51, 51)">大鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒实验原理
是采用双抗体一步夹心法酶联吸附试验(ELISA)。往预先包被人胰岛素受体α(INSRA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并 洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成 终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胰岛素受体α(INSRA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样本处理要求
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能人上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以准确结果。所有试剂都在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 实验还需要酶标仪(450nm),37℃恒温箱,加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸馏水或去离子水。
11. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
12. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
13. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
六、操作步骤
1. 对应板孔中加入100μL标准品工作液或样本,37℃孵育90分钟 | |
2. 弃掉板内液体后,立即加入100μL生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟 | |
3. 弃掉板内液体,洗板3次 | |
4. 每孔加入100μL HRP酶结合物工作液,37℃孵育30分钟,弃掉板内液体,洗板5次 | |
5. 每孔加入90μL底物溶液,37℃孵育15分钟左右 | |
6. 每孔加入50μL终止液 | |
7. 立即在450nm波长下读数,处理数据 |
七、实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
代理品牌:
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Fluotics | Fluotics公司致力于为生命科学研究和诊断市场提供的产品和服务。Fluotics的产品包括PCR管、离心管、移液器和其他实验室消耗品。 |
Chemglass | Chemglass Life Sciences LLC成立于2009年,是Chemglass, Inc.制造的科学和化学产品的销售分支机构。Chemglass Life Sciences还提供完整的色谱瓶/密封件和细胞/组织培养产品系列。 |
citeqbiologics | Citeq Biologics 是一家专注于自然过敏原生产的公司,提供霉菌、蟑螂和蜜蜂马蜂毒素等多种过敏原原料。 |
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ChromaTec | ChromaTec GmbH是格赖夫斯瓦尔德-罗斯托克生物区的一家生物技术公司,公司成立于1999年,提供来自凝血诊断领域的人类和重组蛋白,还提供蛋白质分析领域的服务,可以根据客户的要求生产重组蛋白。 |
r2Diagnostics | r2diagnostics是Enzyme研究实验室(ERL)的姊妹公司,目前生产低ISI,液体促凝血酶原激酶(Phosphoplastin RL),肝素和狼疮敏感的APTT,具有24小时重建稳定性的稳健蛋白S试剂盒,适合的高岭土活化KCT用于自动血凝仪,基于毒液的筛选和用于LA的确认试剂,以及用酶研究实验室的人凝血酶构建的凝血酶时间和纤维蛋白原试剂 |
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macklin | macklin公司业务包含精细化学、生命科学、分析色谱和材料科学四大板块的试剂研发、生产和销售。 |
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cobioer | 南京科佰生物科技有限公司成立于2013年,是一家提供自主生物产品,提供生命医学研究外包服务,生物大数据库的综合型公司。公司在多年的发展历程中,整合资源,悉心研发逐步建立起“肿瘤细胞库”,“STR鉴定比对信息库”,“DNA/RNA标准品库”,“药靶细胞库”,“示踪细胞库”,“蛋白标准品库”,“基因表达和突变数据库”等产品和数据库,同时开发了分子生物学、蛋白工程、病毒包装、抗体工程、细胞工程、药物研发等一系列实验外包服务平台。 公司十分重视研发创新,凭借我们 的细胞功能改造技术、和灵活的基因编辑工具平台,提供包括激酶,GPCR,肿瘤等多类疾病靶点的药物筛选细胞模型,以及数百种多种形式的用于基因诊断的标准参照品。 |
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