ATP柠檬酸裂解酶（ACL）测试盒微量法

ATP柠檬酸裂解酶（ACL）测试盒微量法说明书

微量法 100管/96样 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品名称：ATP柠檬酸裂解酶（ACL）测试盒微量法

货号：LZ-S01198

规格 : 100管/96样

测试方法:微量法

产品分类：脂肪酸代谢系列

发货地：上海

测定意义：

ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的关键酶，其催化产生的乙酰辅酶A可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。
测定原理：

ACL在ATP和辅酶A存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm测定NADH减少速率，计算ACL活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；

试剂三：液体 2μL×1 支，4℃保存；

NAD+和 NADH 的提取：

1 血清（浆）中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 酸性提取液），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：碱性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 碱性提取液），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2 组织中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1g组织，加入 1mL 酸性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1g组织，加入 1mL 碱性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3 细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入1mL 酸性提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱性提取液体积（mL）500~1000：1的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 碱性提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤:

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样,不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

公司正在出售的产品：

ⅣD组0脂酶A2(PLA2G4D)重组蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Group IVD (PLA2G4D)

ECE2 Protein Human 重组人 ECE-2 蛋白 (His 标签)

CD59A重组小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 蛋白 (His 标签) Protein

IL1B Protein Rat 重组大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (mature form)

FGF17重组人 FGF17 蛋白 Protein

小鼠糖化血红蛋白A1c(A1c)ELISA试剂盒 ，英文名： A1c ELISA Kit

小鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA检测试剂盒MouseLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISAkit 96T/48T

人骨成型蛋白7(BMP-7)试剂盒 Human BMP-7 ELISA Kit

Ratfreechorionicgonadoopin,f-βCGELISAKit大鼠游离β绒毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

AKT蛋白共沉淀分析试剂盒5次

Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISA试剂盒小鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

CD59A重组小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 蛋白 (His 标签) Protein

ⅣD组0脂酶A2(PLA2G4D)重组蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Group IVD (PLA2G4D)

FGF17重组人 FGF17 蛋白 Protein

ECE2 Protein Human 重组人 ECE-2 蛋白 (His 标签)

IL1B Protein Rat 重组大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (mature form)

ATP柠檬酸裂解酶（ACL）测试盒微量法小鼠含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)ELISA试剂盒 ，英文名： vWA3A ELISA Kit

人肽聚糖(PG)ELISA检测试剂盒Humanpeptidoglycan,PGELISAKit 96T/48T

大鼠透明质酸酶1(HYAL1)试剂盒 Rat Hyaluronidase-1,HYAL1 ELISA kit

英文名称RatGlycogenphosphorylaseBBELISAKit大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GPBB)规格：96T/48T

化学发光分析20样本

ELISAKitVEGFR-1人血管内皮细胞生长因子受体1规格：48T/96T

生化检测试剂盒常见问题：

在使用生化检测试剂盒时，可能会遇到一系列常见问题，这些问题主要涉及到试剂盒的使用、保存、有效期、样本处理以及实验操作等方面。以下是一些常见的问题及其解决方法：

一、‌测定原理‌：生化试剂盒通过化学反应或酶促反应测定样本中物质的含量或酶活性。常用的仪器包括分光光度计和酶标仪，它们的测定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可进行测定‌。

‌二、选择不同规格的试剂盒‌：根据实验的实际情况选择合适的试剂盒。如果实验室有酶标仪且具备检测波长，可以选择微量法试剂盒；如果有分光光度计及相应规格的比色皿，则可以选择常量法或微量法试剂盒。建议购买前仔细阅读说明书，确认自备的仪器和试剂是否符合要求‌。

‌三、保存方法‌：收到试剂盒后，如果暂时不用，应按照外包装上指示的温度保存。拆开包装后，应按照每个试剂的保存温度进行保存，注意有些试剂忌反复冻融，有些粉剂溶解后性质不稳定‌。

四、‌有效期‌：一般生化试剂盒的有效期为6个月，也有特殊货号的有效期为1年。具体以实际收到货物的标签信息为准‌1。

‌五、样本处理‌：新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定，但有些生理活性物质容易降解，建议使用新鲜样本测定。对于冷冻样本，建议在-70℃或液氮中保存。样本在不同温度下的保存时间有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存3个月‌。

‌六、土壤酶活性测定‌：对于土壤酶活性的测定，建议将鲜土风干并过筛后取样，以测定的重复性。若使用鲜土测定，需样本的颗粒大小一致且水分含量相似‌。

七、‌预测定‌：在进行正式测定前，建议选择2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。通过预测定可以全面反映样品特点、试剂质量、仪器设备稳定性和操作规范性，确保正式测定结果真实可靠‌。