微生物磷脂酰肌醇3磷酸本生试剂盒

影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。

区分ELISA试剂盒的方法：
一：选定一个检测范围内的浓度做多孔重复，可看出平行性好不好。即板内CV值的大小，此操作时需求当心加样的性。对一些制造较粗糙的试剂盒来说，板间CV值是较大的。
二：可选用已知浓度的重组细胞因子，稀释到检测范围内作为样本参加，看检测的性。
三：对用待测目标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的小浓度稀释，可测出灵敏度，主张5个复孔以上才有含义。一般厂家以20个复孔做出的成果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述，也可判别出所购试剂盒是否有夸张之说。
四：如果有相同目标的试剂盒，可用对方的标准品作为样本，分别参加各自的试剂盒做检测，以检测试剂盒的真实性，性。如其中一种是的，比较牢靠的话，可作为标准来验证另一试剂盒的程度。

ELISA试剂盒：准备与贮存
ELISA试剂盒收到后立即贮存于2-8℃下，效期见试剂盒标签;所有成分在2-8℃下可保存至有效期。使用前，所有试剂平衡至室温，不同批次的试剂不能交换使用。
1. 包被板，96孔，包被了抗人胎球蛋白A抗体;微孔板固定于板架上，密封于含有干燥剂的铝箔密封袋内;贮存于2-8℃至有效期。
2. 胎球蛋白A示踪抗体，1瓶，0.6 ml，浓缩，HRP标记的抗人胎球蛋白A示踪抗体溶于稳定的蛋白基质中;此试剂使用前需用示踪剂抗体稀释液进行稀释;贮存于2-8℃至有效期。
3. 示踪抗体稀释液，1瓶，11ml，即用，Trizma盐酸溶于缓冲液;根据实验步骤用于示踪抗体稀释;贮存于2-8℃至有效期。
4. 试验缓冲液，浓缩，1瓶，11ml，含牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐;建议使用前以1:10比例用双蒸水稀释(如11 ml浓缩+99 ml的双蒸水);贮存于2-8℃至有效期。
5. 洗涤液，浓缩，1瓶，20ml，30倍浓缩;试验前需用580ml的双蒸水稀释，混匀;一旦稀释，不含叠氮化物防腐剂的磷酸缓冲盐洗涤液会含表面活性剂;稀释的洗涤液在室温下可保存至效期。
6. HRP底物液;1瓶，12ml，含过氧化氢的TMB底物液;贮存于2-8℃至有效期。
7. 终止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸，贮存于2-8℃至有效期。
8. 胎球蛋白A标准品，5瓶，含胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质;各标准品浓度见瓶子标签;3次冻存周期使用后，所有标准品保存至-20℃或更低。
9. 胎球蛋白A质控，2瓶，含人胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质，各质控的浓度范围见瓶子标签，3次冻存周期使用后质控保存至-20℃或更低。