植物维生素D2本生试剂盒

影响ELISA试剂盒实验的因素
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体(或抗原)的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性;
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。
二、试验仪器
1、ELISA试剂盒加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低;
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。
三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低;
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体(抗原)脱落而影响实验结果的准确性;
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性;
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
5、抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。

区分ELISA试剂盒的方法：
一：选定一个检测范围内的浓度做多孔重复，可看出平行性好不好。即板内CV值的大小，此操作时需求当心加样的性。对一些制造较粗糙的试剂盒来说，板间CV值是较大的。
二：可选用已知浓度的重组细胞因子，稀释到检测范围内作为样本参加，看检测的性。
三：对用待测目标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的小浓度稀释，可测出灵敏度，主张5个复孔以上才有含义。一般厂家以20个复孔做出的成果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述，也可判别出所购试剂盒是否有夸张之说。
四：如果有相同目标的试剂盒，可用对方的标准品作为样本，分别参加各自的试剂盒做检测，以检测试剂盒的真实性，性。如其中一种是的，比较牢靠的话，可作为标准来验证另一试剂盒的程度。

elisa试剂盒是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
检测种属：人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭、猴ELISA试剂盒等种属。
检测范围：
20μg/L -400μg/L
保存条件及有效期：
1、试剂盒保存：2-8℃。
2、有效期：6个月

ELISA试剂盒：准备与贮存
ELISA试剂盒收到后立即贮存于2-8℃下，效期见试剂盒标签;所有成分在2-8℃下可保存至有效期。使用前，所有试剂平衡至室温，不同批次的试剂不能交换使用。
1. 包被板，96孔，包被了抗人胎球蛋白A抗体;微孔板固定于板架上，密封于含有干燥剂的铝箔密封袋内;贮存于2-8℃至有效期。
2. 胎球蛋白A示踪抗体，1瓶，0.6 ml，浓缩，HRP标记的抗人胎球蛋白A示踪抗体溶于稳定的蛋白基质中;此试剂使用前需用示踪剂抗体稀释液进行稀释;贮存于2-8℃至有效期。
3. 示踪抗体稀释液，1瓶，11ml，即用，Trizma盐酸溶于缓冲液;根据实验步骤用于示踪抗体稀释;贮存于2-8℃至有效期。
4. 试验缓冲液，浓缩，1瓶，11ml，含牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐;建议使用前以1:10比例用双蒸水稀释(如11 ml浓缩+99 ml的双蒸水);贮存于2-8℃至有效期。
5. 洗涤液，浓缩，1瓶，20ml，30倍浓缩;试验前需用580ml的双蒸水稀释，混匀;一旦稀释，不含叠氮化物防腐剂的磷酸缓冲盐洗涤液会含表面活性剂;稀释的洗涤液在室温下可保存至效期。
6. HRP底物液;1瓶，12ml，含过氧化氢的TMB底物液;贮存于2-8℃至有效期。
7. 终止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸，贮存于2-8℃至有效期。
8. 胎球蛋白A标准品，5瓶，含胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质;各标准品浓度见瓶子标签;3次冻存周期使用后，所有标准品保存至-20℃或更低。
9. 胎球蛋白A质控，2瓶，含人胎球蛋白A，不含叠氮化物防腐剂的液态牛血清基质，各质控的浓度范围见瓶子标签，3次冻存周期使用后质控保存至-20℃或更低。
ELISA试剂盒保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。
为什么ELISA反响总是需求一定时刻的温育?
ELISA属固相测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生，以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触，这是一个逐步平衡的进程，因而需经扩散才能到达反响的结尾。在这以后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。
温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。
37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度，在建立ELISA方法作反响动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1～2小时，产品的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为，在放射测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成多的沉淀。但因所需时刻太长，在ELISA试剂盒中一般不予选用。
ELISA试剂盒实验、检测法操作总结
对于ELISA试剂盒实验操作，一些老师可谓是得心顺手，操作起来很流畅，但对于一些实验新手，大概只是背熟了理论概况，在实践上，还是缺乏经验，不知从何下手，今日，BUNSEN本生为帮助大家更好更顺利的完成实验，特对ELISA试剂盒实验操作经验进行了总结，一起来看看吧：
1. elisa实验中每一个步骤都要认真对待，省去任何一个步骤或者不认真对待都可能导致elisa实验的失败
2. tip头吸完后马上从移液器上取下来，以免忙乱的时候又以同一tip汲取另一种试剂
3. elisa实验开始前认真做个实验计划，做实验时要专心致志，不要三心二意操作，必要时候进行记录以便后期寻找出错原因，在有部分实验数据出来时。
4. 每次elisa实验结束，也要及时做好实验报告
5. 在加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间过长浓度不均对实验结果造成影响
6. elisa实验结束后整理实验台，养成良好习惯
7. 做实验一定要有计划,这个不是为了出文章
8. elisa实验经验分享实验过程中要详细记录实验数据
9. 所有的东西都要标记好日期药品名称浓度等
10. 移液枪用完之后要归到大计量的位置，防止时间导致弹簧失去弹性
11. 不使用酶标枪时不建议一直拿在手里，特别是里面还有液体的时候不可以倒过来
12. 做完实验需洗手，离开实验室前或进入实验室前注意水，电是否安全
13. elisa试验开始之前需查阅资料的时候，如若记要表明出处，方便日后查找
14. 一定要记着关水浴箱
15. 很多实验室的枪头是回收的