线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒差速离心法

线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒差速离心法说明书

差速离心法 50管/48样   

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品名称：线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒差速离心法

货号：LZ-S01139

规格 : 50管/48样

测试方法:差速离心法

产品分类：氧化磷酸化系列

发货地 ：上海

测定意义：

线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此，准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。

测定原理：

利用试剂温和匀浆组织和细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体；利用试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶。

需自备的仪器和用品

超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂三：10mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂四：1mL×1 支，-20℃保存；

提取步骤

1、 准确称取约 0.1g 组织或收集约 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂四，用冰浴匀浆器或研钵研磨。

2、 4 ℃ 600 g 离心 5min。

3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g 离心 10min。

4、 上清液即胞浆提取物，可用于研究线粒体蛋白向胞浆的释放。

5、 沉淀为完整线粒体。含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。可用于线粒体的生理功能等方面的研究。

6、 在沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体酶活性测定。

7、 在沉淀中加入 200uL 试剂三和 2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体蛋白浓度测定。

操作步骤:

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样,不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

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生化检测试剂盒常见问题：

在使用生化检测试剂盒时，可能会遇到一系列常见问题，这些问题主要涉及到试剂盒的使用、保存、有效期、样本处理以及实验操作等方面。广州

以下是一些常见的问题及其解决方法：

一、‌测定原理‌：生化试剂盒通过化学反应或酶促反应测定样本中物质的含量或酶活性。常用的仪器包括分光光度计和酶标仪，它们的测定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可进行测定‌。

‌二、选择不同规格的试剂盒‌：根据实验的实际情况选择合适的试剂盒。如果实验室有酶标仪且具备检测波长，可以选择微量法试剂盒；如果有分光光度计及相应规格的比色皿，则可以选择常量法或微量法试剂盒。建议购买前仔细阅读说明书，确认自备的仪器和试剂是否符合要求‌。

‌三、保存方法‌：收到试剂盒后，如果暂时不用，应按照外包装上指示的温度保存。拆开包装后，应按照每个试剂的保存温度进行保存，注意有些试剂忌反复冻融，有些粉剂溶解后性质不稳定‌。

四、‌有效期‌：一般生化试剂盒的有效期为6个月，也有特殊货号的有效期为1年。具体以实际收到货物的标签信息为准‌1。

‌五、样本处理‌：新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定，但有些生理活性物质容易降解，建议使用新鲜样本测定。对于冷冻样本，建议在-70℃或液氮中保存。样本在不同温度下的保存时间有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存3个月‌。

‌六、土壤酶活性测定‌：对于土壤酶活性的测定，建议将鲜土风干并过筛后取样，以测定的重复性。若使用鲜土测定，需样本的颗粒大小一致且水分含量相似‌。

七、‌预测定‌：在进行正式测定前，建议选择2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。通过预测定可以全面反映样品特点、试剂质量、仪器设备稳定性和操作规范性，确保正式测定结果真实可靠‌。