4香豆酸：辅酶A连接酶（4CL)测试盒微量法

4香豆酸：辅酶A连接酶（4CL)测试盒微量法说明书

微量法 100管/96样 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品名称：4香豆酸：辅酶A连接酶（4CL)测试盒微量法

货号：LZ-S01349

规格 : 100管/96样

测试方法:微量法

产品分类：信号系列

发货地：上海

测定意义：

4CL是连接苯途径与木质素特异合成途径的关键酶，主要催化肉桂酸生成相应的肉桂酸辅酶A酯，是合成木质素与其他苯丙烷类化合物的代谢流向调控点。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。

测定原理：

4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA，在333nm下测4-香豆酸CoA生成速率，即可反映4CL活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 25 mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；

NAD+和 NADH 的提取：

1 血清（浆）中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 酸性提取液），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：碱性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 碱性提取液），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2 组织中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1g组织，加入 1mL 酸性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1g组织，加入 1mL 碱性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3 细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入1mL 酸性提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。NADH 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱性提取液体积（mL）500~1000：1的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 碱性提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），60℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤:

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样,不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

公司正在出售的产品：

0脂爬行酶2(PLSCR2)重组蛋白 Recombinant Phospholipid Scramblase 2 (PLSCR2)

AXL Protein Human 重组人 Axl Kinase 蛋白 (His 标签)

PTPRC重组人 CD45 / PTPRC 蛋白 (Fc 标签) Protein

NP Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) (His 标签)

PPT1重组人 PPT1 / Palmitoyl-protein thioesterase 1 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA试剂盒

Human procollagen C peptidase (PCP) ELISA Kit 人前胶原C端肽酶(PCP)ELISA试剂盒

HumansmoothmuscleMyosin,SMMELISAKit 人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAdenosinediphosphate,ADPELISA试剂盒人二0酸腺苷(ADP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

直肠肿瘤标记波形纤维蛋白粪便检测试剂盒50次

MouseAlpha-fetoprotein,AFPELISAKit小鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

PTPRC重组人 CD45 / PTPRC 蛋白 (Fc 标签) Protein

0脂爬行酶2(PLSCR2)重组蛋白 Recombinant Phospholipid Scramblase 2 (PLSCR2)

PPT1重组人 PPT1 / Palmitoyl-protein thioesterase 1 蛋白 (His 标签) Protein

AXL Protein Human 重组人 Axl Kinase 蛋白 (His 标签)

NP Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) (His 标签)

4香豆酸：辅酶A连接酶（4CL)测试盒微量法小鼠补体因子D(CFD)ELISA试剂盒 ，英文名： CFD ELISA Kit

人硫氧化还原蛋白(x)ELISA检测试剂盒Humahioredoxin,xELISAKit 96T/48T

大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)试剂盒 Rat lymphocyte function associated aigen 3,LFA-3 ELISA Kit

英文名称RatcatecholamineELISAKit大鼠儿茶酚胺(CA)规格：96T/48T

酵母乙酰辅酶A乙酰转移酶(ACAT)活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKiBP人视黄醇结合蛋白规格：48T/96T

生化检测试剂盒常见问题：

在使用生化检测试剂盒时，可能会遇到一系列常见问题，这些问题主要涉及到试剂盒的使用、保存、有效期、样本处理以及实验操作等方面。以下是一些常见的问题及其解决方法：

一、‌测定原理‌：生化试剂盒通过化学反应或酶促反应测定样本中物质的含量或酶活性。常用的仪器包括分光光度计和酶标仪，它们的测定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可进行测定‌。

‌二、选择不同规格的试剂盒‌：根据实验的实际情况选择合适的试剂盒。如果实验室有酶标仪且具备检测波长，可以选择微量法试剂盒；如果有分光光度计及相应规格的比色皿，则可以选择常量法或微量法试剂盒。建议购买前仔细阅读说明书，确认自备的仪器和试剂是否符合要求‌。

‌三、保存方法‌：收到试剂盒后，如果暂时不用，应按照外包装上指示的温度保存。拆开包装后，应按照每个试剂的保存温度进行保存，注意有些试剂忌反复冻融，有些粉剂溶解后性质不稳定‌。

四、‌有效期‌：一般生化试剂盒的有效期为6个月，也有特殊货号的有效期为1年。具体以实际收到货物的标签信息为准‌1。

‌五、样本处理‌：新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定，但有些生理活性物质容易降解，建议使用新鲜样本测定。对于冷冻样本，建议在-70℃或液氮中保存。样本在不同温度下的保存时间有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存3个月‌。

‌六、土壤酶活性测定‌：对于土壤酶活性的测定，建议将鲜土风干并过筛后取样，以测定的重复性。若使用鲜土测定，需样本的颗粒大小一致且水分含量相似‌。

七、‌预测定‌：在进行正式测定前，建议选择2-3个预期结果差别较大的样本做预实验。通过预测定可以全面反映样品特点、试剂质量、仪器设备稳定性和操作规范性，确保正式测定结果真实可靠‌。