气相色谱仪测定血液中DHA、EPA含量

气相色谱仪测定血液中DHA、EPA含量
武汉泰特沃斯科技有限公司位于中国武汉，从事气相色谱仪的生产、色谱耗材的代理。以下由武汉泰特沃斯科技有限公司色谱技术人员主要介绍用气相色谱仪测定血液中DHA、EPA含量。GC2030系列气相色谱仪是武汉泰特沃斯科技有限公司新推出的新一代国产气相色谱仪，技术，性能可靠。
二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人体血液中的两种物质，对人体的健康有着重要的影响。因此，使用科学方法对血液中DHA，EPA进行检测是非常重要的。使用气相色谱仪对血液中的DHA和EPA进行检测实验，详细介绍了实验材料、方法和结果，终证实，气相色谱仪适用于检测血液中的DHA和EPA。
DHA，即二十二碳六烯酸，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸，属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。EPA ，即二十碳五烯酸，是鱼油的主要成分，属于Ω-3系列多不饱和脂肪酸。目前测定这两种脂肪酸的方法有很多种，而气相色谱仪法是比较常用的一种。通过对气相色谱仪测定血液中DHA，EPA含量进行探讨，以期更准确地测定血液中DHA和EPA的含量。
1 实验材料的准备
试剂：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均为分析纯；DHA甲酯标准品、EPA甲酯标准品；内标溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸无水乙醇溶液）；盐酸甲醇溶液（氯化钠与浓硫酸反应，产生的气体导入甲醇中，经标定物质的量浓度为1.3 mol/L）。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件的选择
毛细管柱：老化过后毛细管柱，型号FFAP，规格30 m（长）×0.25 mm（内径）×0.25μm（液膜厚度）。柱温：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室温度260 ℃；检测器温度300 ℃；分流比1∶60；进样量1.0 μL。
2.2 样品处理
用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞试管内，加入物质的量浓度为4.5 mol/L的浓硫酸2滴酸化，加内标液10 μL，用漩涡混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩涡混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min离心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞试管备用；把乙酸乙酯提取液用小流量高纯氮气吹干；加入物质的量浓度为1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒温水浴箱中酯化30 min后，冷却。加入分析纯的正己烷1 mL，漩涡混合1 min，静置3 min，提取正己烷层放置在5 mL尖底具塞试管内备用，把正己烷提取液用小流量高纯氮气吹干，加30 μL正己烷溶解。
2.3 色谱分离条件的结果
经过试验，在色谱条件下人血清游离脂肪酸甲酯达到完全分离，互不干扰。
2.4 标准曲线配制
质量浓度为1 mg/mL的脂肪酸混合标准溶液，分别用正己烷将DHA混合准溶液稀释成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、 500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列质量浓度的标准溶液，将EPA混合准溶液稀释成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列质量浓度的标准溶液。以各标准溶液的质量浓度X（mg/mL）为横坐标，对照品的峰面积Y为纵坐标作图，按内标法计算，得出标准曲线。结果DHA的标准曲线为Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的标准曲线为Y= 0.0062X－0.003 6，R=0.996。
脂肪酸的分析过程较为复杂，其中样品的前期处理过程非常关键。衍生化过程中DHA、EPA的酯化效率决定了两种物质含量检测的准确度。此次采用了盐酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取，可完全分离，互不干扰，了结果的准确性。且以正二十三碳烷酸无水乙醇溶液为内标，其保留时间与DHA，EPA相近，能够准确测定DHA，EPA含量。
这种方法精密度和重复性良好，短时间内较稳定，并且在加标回收率试验中，DHA平均回收率为92.0%～93.6%，RSD为3.0%～3.6%，EPA的平均回收率为92.3%～94.0%，RSD为2.8%～4.0%，适用于人血液中DHA，EPA的检测。