PCR实验室建设中的污染来源及防控方法

　　PCR实验是基于核酸水平的微观样本实验，而这些微观样本对温度、ph值等实验环境非常敏感，在尽力维护样本的保存环境的同时，核酸样本污染也成为不可避免的话题。“易查不易察”，污染来的悄无声息，今天未名雷蒙特实验室建设公司小编就给大家简单介绍一下PCR实验室的主要污染来源和实验中如何避免和减少污染的可能性。

　　PCR实验室的污染来源

　　样本间交叉污染：

　　收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。

　　实验试剂污染：

　　在试剂配制过程中，掺入核酸模板导致污染。

　　扩增产物污染：

　　大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖。

　　克隆质粒污染：

　　作为阳性质控品的克隆质粒外溢。

　　PCR实验室的防污染方法

　　PCR实验室建设中合理的实验室分区：

　　PCR实验室设计应合理分区，包含试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。

　　清洁的实验用品：

　　实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。

　　正确的实验操作：

　　实验应在超净工作台内进行，工作台内应放置PCR的微量离心机、各量程的移液器和其他物品。

　　实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染。

　　装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。

　　吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染。

　　PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数；多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量单人单管，实现完全闭管操作。

　　实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处。

　　PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，管盖紧闭。

　　规范的实验设计：

　　应遵循实验室内部质量控制的相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证PCR反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。

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