吉林CIK济南赛尔生物图DCCIK委托培养

3 性自身性疾病: 包括系统性红斑狼疮；干燥综合症；肌炎；皮肌炎；硬皮病等等 MSC具有调节、阻止炎性介质释的重要特性，能对多种细胞起到调节作用，抑制过度的反应；此外MSC分化为新生细胞替代受损细胞，分泌多种细胞因子减轻组织损伤，修复受损组织。 MSC 对自身性疾病具有较好的缓解作用，其中据报道对难治性系统性红斑狼疮，4年完全缓解率达34%，对狼疮肾炎的缓解率达到50%～60%；降低疾病活动度评分及蛋白尿、血肌酐、尿素氮等水平，恢复血清白蛋白及补体，修复受损脏器；对狼疮相关血液系统受损有显著改善作用；对狼疮相关皮肤损害有改善作用。 静脉滴注使用。一般2-4次/疗程，每次间隔一周，可根据疾病情况选择多疗程。 间充质干细胞MSC生长过程 潜伏期→指数增生期→停滞期 (1)潜伏期(latent phase) 细胞接种后,先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期。此时,细胞质回缩, 胞体呈圆球形，然后细胞贴附于载体表面,称贴壁,悬浮期结束。细胞贴壁速度与细胞种类, 培养基成分,载体的理化性质等密切相关。一般情况下，原代培养细胞贴壁速度慢,可达10-24 小时或更多, 而传代细胞系贴壁速度快, 通常10-30分钟即可贴壁。细胞贴壁后还需经过一个潜伏阶段，才进入生长和增殖期。原代培养细胞潜伏期长，约24-96 小时或更长, 连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短，仅需6-24 小时。 (2)指数增生期(logarithmic growth phase) 这是细胞增殖旺盛的阶段，分裂相细胞增多。指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长是否旺盛的一个重要标志。通常以细胞分裂相指数(Mitotic index, MI )表示，即细胞群中每1000 个细胞中的分裂相数。一般细胞的分裂指数介于 0.1%-0.5% ，原代细胞分裂指数较低，而连续细胞和肿瘤细胞分裂相指数可高达3％－5％。指数增生期的细胞活力旺盛时期，是进行各种实验理想时期，也是冻存细胞的免除损伤的有利时机。在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续 3－5 天后，随着细胞数量不断增多、生长空间减少，后细胞相互接触汇合成片。正常细胞相互接触后能抑制细胞运动，这种现象称接触抑制现象(contact inhibition)。而恶性肿瘤细胞无接触抑制现象，能继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩展，使细胞发生堆积(piled up)。细胞接触汇合成片后，虽然发生接触抑制，但只要营养充分，细胞仍能进行增殖分裂，因此细胞数仍然在增多。但是，当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养枯竭和代谢产物的影响，导致细胞分裂停止，这种现象称密度抑制现象(Density Inhibition)。 (3)停滞期(Stagnate phase) 细胞数量达到饱和密度后，如不及时进行传代，细胞就会停止增殖，进入停止期。此时细胞数持平，故也称平台期(Plateau phase)。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动。如不进行分离传代，细胞会因培养液中营养耗尽、代谢产物积聚、pH 下降等因素中毒，出现形态改变，贴壁细胞会脱落，严重的会发生死亡，因此，应及时传代。 使用胰蛋白酶时加入 E DTA的目的是什么 体外培养的细胞受到严重污染时，有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此，防止污染，预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终，才能将发生污染的可能性降到比较小的程度。 一般预防可从以下几方面着手： (1)添加抗生素 各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好(但迄今尚无对抗支原体抗生素)。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理。 (2)从物品、用品消毒灭菌着手 细胞培养所用物品清洗、消毒要，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作：75%的酒精搽拭培养箱后，使用可移动的紫外灯至少消毒30min，加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml 的饱和硫酸铜加3L 灭菌超纯水混合成硫酸铜溶液加入水槽中。 (3)从操作者做起 ①进无菌室前要洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用 75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。 ②操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞，同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。