产品介绍:
产品名称:胡萝卜源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
产品货号:LZ-P4240
规格:50T
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光。
有效期:一年
如何进行 PCR 实验?
一、准备实验材料(1)DNA模板:包含你想要复制的DNA区域。上海(2)引物:短的单链DNA片段,用于指导DNA合成的起始位置。(3)DNA聚合酶:一种酶,用于合成DNA。(4)四种脱氧核苷酸(dNTPs):DNA的构建块。(5)缓冲液:提供适宜的反应环境。(6)镁离子或其它必需的离子:通常作为DNA聚合酶的辅助因子。二、设定反应混合物将所有材料混合在微量离心管中。混合物的总体积通常在20-50微升之间。
![69003.png 截图21.png](http://oss11.huangye88.net/live/ueditor/php/upload/3759034/image/20240207/1707283329169003.png)
3. PCR程序(1)将混合物放入PCR机(热循环仪)中,并设定程序。PCR程序通常包括以下阶段:(2)初次变性:加热至94-98°C,持续几分钟,使DNA双链解开成单链。(3)循环步骤(通常进行30-40次循环):(4)变性阶段:加热至94-98°C,持续20-30秒,使DNA双链解开。(5)退火阶段:降温至50-65°C,持续20-40秒,允许引物与模板DNA结合。(6)延伸阶段:加热至72°C,持续1分钟每1千个碱基,以便DNA聚合酶合成新的DNA链。(7)后延伸:在72°C下持续5-10分钟,确保所有可用的DNA模板都被复制。(8)保持阶段:将温度降至4-15°C,直到用户准备取出样品。
实验步骤:
一.胡萝卜源性成分PCR样品制备
1.PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为佳。
2.PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul SSCP上样缓冲液(变性缓冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。
3.PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。
![16274.jpg 6.jpg](http://oss11.huangye88.net/live/ueditor/php/upload/3759034/image/20240207/1707283923616274.jpg)
PCR实验的基本步骤:
DNA聚合酶是实验室中常用的生物学酶之一,在PCR实验中具有重要的作用。实验室常用的DNA聚合酶,包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。
一Taq聚合酶:
Taq聚合酶是由Thermus aquaticus细菌产生的一种DNA聚合酶,在分子生物学研究中得到广泛应用。Taq聚合酶具有热稳定性,可以在高温条件下保持活性,这是由于其来源于热液生物,能够存活和正常活动于高温环境。这使得Taq聚合酶在聚合酶链式反应(PCR)中起到关键的作用。Taq聚合酶能够按照DNA模板合成新的DNA链,因此在PCR中用于扩增目标DNA片段。然而,Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性,导致其生成的PCR产物末端容易出现额外的腺嘌呤碱基。因此,在某些应用中,需要使用具有外切酶活性的聚合酶。
二胡萝卜源性成分试剂、Pfu聚合酶:
Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶相比,Pfu聚合酶具有更高的热稳定性和耐酶性。这使得Pfu聚合酶在高温PCR反应中表现出色,其高度稳定的酶活性能够确保PCR反应的可靠性和准确性。此外,Pfu聚合酶还具有3'-5'外切酶活性,可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配,有效防止误差累积。因此,Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。
三、Tth聚合酶:
Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8细菌产生的一种DNA聚合酶。与Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同,Tth聚合酶具有热活性反转转录酶活性,可以将RNA模板合成相应的DNA链。因此,Tth聚合酶在逆转录PCR(RT-PCR)中得到广泛应用,用于将RNA转录成DNA,并通过增加热活性酶来实现PCR扩增。此外,Tth聚合酶还具有一定的外切酶活性,可用于修复和校正PCR产物的末端。
![09701.jpg 5.jpg](http://oss11.huangye88.net/live/ueditor/php/upload/3759034/image/20240207/1707283825109701.jpg)
100643-71-8 录雷他定相关物质A标准品 15mg
升 Cimicfuga goetida L. 升素 37921-38-3 C16H18O6 ≥98% 异环灵酰安 杂质A(I0060002
生物苄呋菊酯标准 联本标准品 双嘧草迷标准品
辛基三嗪酮相关物质C标准品乙基己基三嗪酮相关物质C20mg
辽东楤木皂苷VII HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
两面针 Zanthoxylum nitidum (Roxb.)DC. Nitidine Chloride 录化两面针碱 13063-04-2 C21H18NO4+ ≥98%
芝麻酚Sqscmol233-31-320mg
叶底珠Securinega suffricosa 5-icosyl-1,3-benzenediol 5-二十三基-1,3-本二醇 70110-60-0 C29H52O2 达那坐(100126
HPLC含量测定录典羟喹100325-200901常温,避光100mg
非诺贝特相关物质C标准品217636-48-1 25mg
小叶藤黄Garcinia cowa Norathyriol 降阿赛里奥,1,3,6,7-四羟基口山酮 3542-72-1 C13H8O6 ≥99%
紫苏醛Pqrillccldqhydq18031-40-820mg
狭叶獐牙菜Sweia angustifolia alpha-Tocopherolinoneone 托可醌 2067006 C29H50O3 倍录米松(100119
检查用扑米酮100331-201002常温,避光50mg
Finasteride 非那雄胺标准品98319-26-7 200mg
胡萝卜源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒小鼠白介素27(IL-27)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human deoxypyridinoline crosslinks (DPD) ELISA Kit 人脱氧胶原交联(DPD)ELISA试剂盒
HumanOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit 人骨钙素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Humancarboxyhemoglobin,HbCOELISA试剂盒人血红蛋白(HbCO)ELISA试剂盒ಉ㒠ಉ
本公司,是一家以主营胡萝卜源性成分PCR,胡萝卜源性成分试剂企业。"上海联祖生物科技有限公司Shanghai RayzBio Biotechnology Co., Ltd成立于2020年,坐落于中国魔都上海,提供生物试剂、试剂、生化试剂、实验仪器及耗材、制药工业及原料、细胞培养试剂和科研诊断等各类科研产品,供应于生命科学基础开发研究、疾病诊断与制药、生物技术、卫生与健康等诸多领域。
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