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牛补体片段3d(C3d)ELISA试剂盒免费待测

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牛补体片段3d(C3d)ELISA试剂盒 免费待测



要求


做好对照


正式试验时,应分别以阳性对照阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特反应,可采用羊、兔或BSA等封闭。


实验条件的选择


ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:


(1) 固相载体的选择:许多可作为固相载体,如聚氯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。


(2) 包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。


(3) 酶标记工作浓度的选择:用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验里准确地滴定其工作浓度。


(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMBABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。


进口分装:


检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。


试剂盒的曲线


试剂盒的曲线相关系数R≥0.98。


试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。


试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。


检测及酶结合物的稀释度(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,实验结果的重复性。


白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种形成,它的特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的等,也备受关注. 并且已证实白介素-6病理学存在的相关关系.例如,报道多种的生长因子为白介素-6, 瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性和自身发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠细胞基质上清的白介素6 原理 此试剂盒运用了两种,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94的 700 pg/mL 预期用途





试剂盒是固相夹心法酶联吸附实验(ELISA).已知浓度的品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。





HBsAg试剂特点(检测:临床夹心法):包被为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,检测的特(99.98%)检测的灵敏度,应用Parl Ehrich 学说(PEI)HBsAg品,对ad品的灵敏度为0.05ng/ml对ay品灵敏度为0.025ng/ml



 



操作:



双夹心法


1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。


2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。


3. 加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。


4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。


5. 终止反应:于各反应孔中加入2M0.05ml。


6. 结果判定:可于白色背景上,直接用观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。


间接法


1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;


2.次日洗涤3次;


3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;


4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二)0.1ml;


5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;


6.一遍用DDW洗涤。


其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。









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