PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以各实验区的压力要求。
1、试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
2、标本制备区
该区域主要进行的操作为标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
3、扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区) 的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区) 制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在轮扩增后打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样在本区内进行。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
4、扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。
本区是主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
实验室设备确定校准周期的原则应遵循以下两条原则:
(一) 在检定周期内测量仪器超出允许误差的风险应降至;
(二) 校准费用应在尽可能少的基础上经济合理, 应力求风险和费用两者平衡的值。
实验台台面:一般采用环氧树脂板、实芯理化板、陶瓷板、大理石板、
千思板、不锈钢板等,表面经技术处理,光滑孔,耐酸碱、防腐蚀,铣边处
理,台面耐腐蚀、防水均达到实验室行业标准。